Ao no Miburo: Serizawa Ansatsu-hen Musim kedua anime ini melanjutkan kisah dari cerita sebelumnya dengan latar Kyoto di penghujung era Edo, saat situasi politik semakin memanas dan konflik tak terelakkan. Kehidupan Nio berubah sepenuhnya setelah pertemuannya dengan dua pendekar legendaris, Toshizou Hijikata dan Souji Okita, anggota inti Mibu Roshigumi, kelompok samurai yang paling disegani dan ditakuti di Kyoto.

Bersama Tarou dan Hajime, dua pemuda seusianya yang juga bergabung pada waktu yang sama, Nio mulai menapaki jalan keras sebagai samurai. Dengan tekad yang sama—ingin menjadi kuat dan mengubah dunia—mereka menjalani latihan berat dan menghadapi berbagai konflik nyata di tengah kekacauan zaman.

Di bawah bendera Miburo, ketiga pemuda ini bertarung bahu-membahu dengan para anggota lain demi menegakkan keadilan versi mereka sendiri. Di sinilah babak baru perjalanan Shinsengumi dimulai, penuh pertarungan sengit, idealisme muda, dan pilihan-pilihan sulit yang akan menentukan masa depan mereka di era yang terus berubah.